诺华T-charge平台：两天完成自体CAR-T制备!

体外T细胞培养时间过长会耗尽CAR-T终产物中原始和干细胞记忆T细胞（Tscm）亚群，而Tscm对非常重要的抗肿瘤。最近诺华公司披露其 T-charge快速生产工艺。YTB323是靶向CD19的自体CAR-T细胞疗法，其制造工艺大大简化，消除了长培养周期带来的复杂性工艺。改进的T-Charge™ 工艺保持了T细胞的干性，这是一个与治疗潜力密切相关的重要特征，从而增强了CAR-T细胞的扩增和抗肿瘤活性。 

1. T-charge快速生产CAR-T的临床前研究

最新的T-Charge™ 制造平台在临床前研究中，将体外培养时间缩短至约24小时，使最终产品在不到2天的时间内完成这个生产过程。

首先从健康供体的白细胞中富集T细胞，然后用慢病毒载体转染，慢病毒载体编码的CAR和用于tisagenlecleucel细胞中额相同。转染后培养约24小时后，收集细胞（命名为YTB323细胞），清洗后配制成最终制剂。

对照组使用传统的体外扩增CAR-T方案，采用相同的健康供体T细胞和相同的慢病毒载体生成CAR-T细胞（CTL*019）。

采用免疫缺陷NSG小鼠（NOD scid IL2Rg null）对CAR-T进行T细胞功能测定。免疫缺陷NSG小鼠接种了pre-B-ALL细胞（NALM6）或DLBCL细胞系（TMD-8），以评估抗肿瘤活性和CAR-T扩增。

采用这种新型工艺生产的YTB323 CAR-T产品保留了单采后的白细胞的免疫表型；具体而言，如流式细胞术所示，保留原始/Tscm细胞（CD45RO-/CCR7+）。相反，传统体外扩增工艺产生的最终细胞主要由中央记忆T细胞（Tcm）（CD45RO+/CCR7+）组成（图1A）。

单细胞RNA测序实验证明了T-Charge工艺生产的CAR-T细胞和单采后的白细胞表型是一致的。

细胞因子分泌试验和肿瘤重复刺激试验显示，YTB323 CAR-T细胞的效力更强。与CTL*019相比，在CD19特异性激活后，YTB323 T细胞分泌的IL-2和IFN-γ水平高出10-17倍。此外，YTB323细胞抑制肿瘤细胞需要的浓度比CTL*019低30倍。这两种检测都清楚地证明了YTB323 CAR-T细胞在体外的效力明显增强。

在免疫缺陷NSG小鼠B细胞白细胞模型中，细胞注射后4周内研究中用流式细胞术每周分析血液中CD3+/CAR+T细胞水平，计算YTB323和CTL*019细胞的Cmax和AUC 0-21d。

与CTL*019相比，YTB323的Cmax增加≈40倍，AUC0-21d增加≈33倍。

与CTL*019相比，观察到YTB323的Tmax延迟至少1周出现，证明了增加的细胞是由YTB323分化程度较低的T细胞分化而来的。

传统工艺生产的CTL*019细胞需要0.5×106 CAR+细胞才能明显抑制NALM6 B-ALL肿瘤的生长，而YTB323只要0.1×10 6CAR+细胞（图B）。

在DLBCL模型中（TMD-8），只有YTB323细胞能够抑制肿瘤，而相同剂量的的CTL*019甚至促进肿瘤生长。

图1. A：细胞表型。B：小鼠模型中的抗肿瘤效果。

2. T-Charge制备的细胞的临床试验

I期、多中心、剂量递增研究（NCT03960840）评估了YTB323对B细胞恶性肿瘤患者的安全性和初步疗效。

在复发难治性弥漫大B细胞淋巴瘤（r/r DLBCL），入组标准为成年患者、ECOG 0-1和既往接受2线以上治疗，包括自体造血干细胞移植。

患者接受单剂量YTB323，剂量水平为1-2.5×106个CAR+细胞、5-12.5×106个CAR+细胞或25-40×106个CAR+细胞。

截至2021年4月16日，15例R/R DLBCL入组：4例在DL1，10例在DL2，1例在DL3。中位年龄为65岁；大多数（60%）接受二线治疗；4例（27%）接受过自体骨髓移植。无论研究药物关系如何，均报告所有不良事件。

在15名可评估安全性的患者中，4名患者（27%）报告至少1次3级不良事件，6名患者（40%）报告至少1次4级不良事件，2名患者（13%）报告至少1次5级不良事件。

最常见的3/4级不良事件为血小板减少（n=2,13%）、中性粒细胞减少（n=3,20%）和中性粒细胞减少（n=3,20%）。7名患者（47%）出现神经系统不良事件。

符合DLT标准的4名患者（27%）出现细胞因子释放综合征（CRS）。两名（13%）和一名（7%）患者分别使用tocilizumab单抗和皮质类固醇治疗CRS。

试验中有4例死亡，均与YTB323无关：2例死于疾病进展，2例死于败血症。

在DL1组时，4名患者在Mo3时可评估疗效，ORR和CR率均为25%（95%CI，0.6%-80.6%）。

在DL2组时，8名患者在第3个月可评估疗效，其中2名患者在输注YTB323前已CR；ORR和CR率均为75%（95%CI，34.9%-96.8%）。

观察到剂量依赖性细胞扩增（Cmax和AUC 0-28d）。Tmax与峰值细胞因子水平一致（输注后约16天）。

 图2  DL1和DL2剂量下的患者反应。

references:

1、Preservation of T-Cell Stemness with a Novel Expansionless CAR-T Manufacturing Process, Which Reduces Manufacturing Time to Less Than Two Days, Drives Enhanced CAR-T Cell Efficacy

2、A First-in-Human Study of YTB323, a Novel, Autologous CD19-Directed CAR-T Cell Therapy Manufactured Using the Novel T-ChargeTM platform, for the Treatment of Patients (Pts) with Relapsed/Refractory (r/r) Diffuse Large B-Cell Lymphoma (DLBCL)

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